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Type: TESE DIGITAL
Title: Caracterização molecular das espécies de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. e levantamento das espécies de protozoários de vida livre presentes em amostras de água superficial e do sedimento do Rio Atibaia, Campinas, São Paulo  
Title Alternative: Molecular characterization of Giardia spp. and Cryptosporidium spp. species and survey of ciliated protozoa present in surface water and sediment samples from Atibaia River, Campinas, São Paulo  
Author: Bonatti, Tais Rondello, 1980-
Abstract: Resumo: O conhecimento acerca da biodiversidade de protozoários ciliados e dos patogênicos pode permitir inferências sobre o grau de contaminação de um corpo hídrico assim como as possíveis fontes que levam a ela e, portanto, contribuir para o monitoramento da qualidade da água. O presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade da água e do sedimento de dois pontos próximos à captação de água para abastecimento público do Rio Atibaia (Campinas, SP) por meio da caracterização morfológica de comunidades biológicas de protozoários ciliados e de patogênicos (Giardia spp. e Cryptosporidium spp.). Amostras de água e sedimento de dois pontos do Rio Atibaia (P1 e P2), foram colhidas mensalmente durante 24 meses. Para o estudo da ciliatofauna foram realizadas análises qualitativa (observação in vivo e após impregnação pela prata) e quantitativa (enumeração in vivo e impregnação quantitativa pela protargol - QPS). Para a pesquisa e caracterização de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. foram empregadas metodologias específicas para detecção de cistos e oocistos nos diferentes tipos de amostra e purificação por separação imunomagnética (IMS). Para a caracterização molecular dos cistos de Giardia spp. e oocistos Cryptosporidium spp. isolados das amostras da água e do sedimento do rio Atibaia, as alíquotas purificadas por IMS e positivas na leitura por imunofluorescência, foram submetidas a extração do DNA e posterior nested PCR. Para os protozoários ciliados, 73 táxons pertencentes a 53 gêneros foram identificados em amostras de água superficial e de sedimentos. O número de morfoespécies registradas no P2, tanto na água quanto no sedimento foi maior o que sugere que a riqueza pode estar sendo influenciada pela qualidade da água nesse ponto. Nas amostras de água bruta superficial, os cistos de Giardia spp. foram detectados em 62,5 % delas e, oocistos de Cryptosporidium spp., em 25,0 %. Considerando as amostras de sedimento, os cistos de Giardia spp. foram detectados em 35,4% delas enquanto a positividade para oocistos de Cryptosporidium spp. foi de 16,6 %. Um total de 57 amostras positivas para Giardia sp. foram submetidas ao sequenciamento. A maioria das amostras foi caracterizada como sub-genótipo AII o que evidencia o caráter humano da contaminação por esgoto das águas do Rio Atibaia, e ressalta o grau de impactação de tal corpo hídrico. Não foi amplificado o DNA das amostras positivas para Cryptosporidium spp. confirmadas pela imunofluorescência, devido à presença de inibidores nas amostras analisadas. Paralelamente, a predação de cistos e oocistos por cinco espécies de protozoários ciliados a partir de amostras de água superficial colhidas do Rio Atibaia foi verificada em condições de laboratório. As espécies Blepharisma sinuosum, Euplotes aediculatus, Oxytricha granulifera, Spirostomum minus complexo e Stentor coeruleus ingeriram cistos e oocistos. Esses achados relacionados a predação podem contribuir para uma melhor compreensão da remoção biológica destes agentes patogênicos em ambientes aquáticos

Abstract: The knowledge of the biodiversity of ciliated protozoa and pathogens may allow inferences about the degree of contamination of a water body as well as possible sources that lead to it and thus contribute to the monitoring of water quality. This study aimed to evaluate the quality of water and sediment from two points near the water catchment for public supply of Atibaia River (P1 and P2) through the morphological characterization of biological communities of ciliated and pathogenic protozoa (Giardia spp. and Cryptosporidium spp.). Water and sediment samples from two points of Atibaia River, Campinas, SP, were collected monthly for 24 months. For ciliated protozoa study, it was conducted conducted qualitative analysis (in vivo observation and silver impregnation) and quantitative (in vivo enumeration and quantitative protargol staining - QPS). For research and characterization of Giardia spp. and Cryptosporidium spp. specific methods for detection of cysts and oocysts in different sample types and purification of the pathogenic protozoan were employed such as immunomagnetic separation. The molecular characterization of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts isolated from samples of water and sediment from the Atibaia river, aliquots purified by IMS and positive by immunofluorescence, were subjected to DNA extraction and subsequent nested PCR. For ciliate protozoa, 73 taxa belonging to 53 genera were identified in samples of surface water and sediment. The number and frequency of detected ciliate species in water and sediment samples were higher in 2. The number of registered morphospecies at P2, both in water and sediment was higher, suggesting that at this point, richness can be influenced by the water quality. For surface water samples, Giardia spp. was detected in 62.5% of them while Cryptosporidium spp. in 25.0%. Considering the sediment samples, Giardia spp. was detected in 35.4% of them while Cryptosporidium spp. the positivity was 16.6%. A total of 57 samples positive for Giardia was subjected to sequencing. Most of the samples was characterized as sub-genotype AII which highlights the human origin of the sewage contamination of the Atibaia River and highlights the impact degree of such water body. The DNA from Cryptosporidium spp. was not amplified even though samples were positive by immunofluorescence. This may have occurred due to the presence of inhibitors in the samples. At the same time, predation of cysts and oocysts by five species of ciliated protozoa from surface water samples taken from the Atibaia River in Campinas, São Paulo, Brazil was tested in laboratory conditions. The species Blepharisma sinuosum, Euplotes aediculatus, Oxytricha granulifera, Spirostomum minus Complex and Stentor coeruleus ingested cysts and oocysts. These findings related to predation can contribute to a better understanding of biological removal of these pathogens in aquatic environments
Subject: Giardia
Oocistos
Cryptosporidium
Ciliado
Águas superficiais
Sedimentos fluviais
Editor: [s.n.]
Citationo: BONATTI, Tais Rondello. Caracterização molecular das espécies de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. e levantamento das espécies de protozoários de vida livre presentes em amostras de água superficial e do sedimento do Rio Atibaia, Campinas, São Paulo  . 2016. 1 recurso online (191 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.
Date Issue: 2016
Appears in Collections:IB - Dissertação e Tese

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